Estimación del porcentaje de translocación de fosfatidilserina como indicador de apoptosis en espermatozoides epididimarios frescos de alpaca analizados por citometría de flujo

Abstract

El objetivo del estudio fue caracterizar la translocación de fosfatidilserina (PS) como marcador temprano de apoptosis en espermatozoides epididimarios de alpaca (Vicugna pacos) durante la incubación in vitro y la criopreservación. Se recolectaron testículos de alpacas clínicamente sanas y se obtuvieron espermatozoides de la cauda epididimaria. En el primer experimento se evaluó el efecto del tiempo de incubación (0–4 h a 37 °C) sobre la exposición de PS mediante Anexina V-FITC y ioduro de propidio (PI). En el segundo, se compararon muestras frescas y criopreservadas. El análisis se realizó por citometría de flujo. Durante la incubación, el porcentaje de espermatozoides viables (Anexina V⁻/PI⁻) disminuyó significativamente (36,0 ± 11,2 % a 19,9 ± 9,9 %), al igual que los apoptóticos tempranos (Anexina V⁺/PI⁻) (25,6 ± 9,4 % a 12,8 ± 9,0 %), mientras que los apoptóticos tardíos (Anexina V⁺/PI⁺) y necróticos (Anexina V⁻/PI⁺) aumentaron progresivamente (p < 0,05). La criopreservación redujo la proporción de espermatozoides viables (30,0 ± 6,2 % a 13,4 ± 2,3 %) y apoptóticos tempranos (21,9 ± 9,8 % a 7,5 ± 6,5 %), e incrementó la de apoptóticos tardíos (35,1 ± 10,4 % a 54,8 ± 9,7 %; p < 0,05). Estos resultados evidencian que la exposición de PS se incrementa progresivamente durante la incubación y la criopreservación, reflejando daño de membrana y progresión hacia apoptosis tardía o necrosis. La detección de PS constituye un marcador sensible del daño espermático inducido por estrés térmico y criogénico, útil para optimizar protocolos de conservación en camélidos sudamericanos.