FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y BIOLÓGICAS CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA “Presencia de Bartonella spp. en murciélagos no hematófagos en la Reserva Ecológica Taricaya, Puerto Maldonado, Madre de Dios.” Tesis para optar el título profesional de: MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA Presentado por: Noelia Roxana Medrano Uchuya (0000-0002-3426-2362) Asesor: Siever Miguel Morales Cauti (0000-0002-5396-8889) Lima – Perú 2021 DEDICATORIA Dedico este trabajo realizado, en primer y gran lugar a Dios. Todo lo que soy, todo lo que tengo, mis logros siempre vienen de ti y son para ti. En segundo lugar, dedico de manera especial, esta gran meta en mi vida a mis padres Roxana Uchuya y John Medrano, por ser mi ejemplo en todo momento y en todo aspecto, nada hubiera sido posible sin su apoyo, sacrificio y sobretodo amor durante tantos años. AGRADECIMIENTOS En primer lugar, agradezco inmensamente a mi esposo, Ángel García, por su paciencia, ternura, compañía y ser mi mano derecha en cada situación por más alegre o difícil que parezca. Gracias por creer en mí y en mis sueños. En segundo lugar, mi más profundo agradecimiento a mi asesor Mg. Siever Morales, por su apoyo constante a pesar de estos tiempos difíciles de pandemias, por todo su conocimiento y dedicación impartida. Y por último al Centro de Rescate Taricaya, a todos los miembros, desde el gran Fernando Rosemberg, al Blg. Hugo Zamora, Bach. MV Rodrigo Espinoza, Bach. MV Diego Rolim, Blg. Rachel Kilby y cada una de las personas que fueron un pilar crucial en mi crecimiento para amar la fauna silvestre y la importancia de su conservación. RESUMEN El presente estudio tuvo como objetivo determinar la presencia de Bartonella spp. en distintos grupos de murciélagos no hematófagos en la Reserva Ecológica Taricaya en Puerto Maldonado, Madre de Dios. Se realizó un muestreo no probabilístico, trabajando con las especies del Orden Chiroptera, pertenecientes a tres grupos de clasificación de acuerdo a dietas ecológicas relevantes: frugívoros, omnívoros y otros (incluyendo pescadores, carnívoros, insectívoros y nectarívoros). Se emplearon 34 redes neblineras (6m, 9m y 12m), haciendo un total de 396 metros en 13 noches de esfuerzo no consecutivas. Teniendo como muestra final 62 murciélagos, pertenecientes a 16 especies. Se obtuvieron alrededor de 30µl de sangre mediante la punción de la vena cefálica con una aguja estéril 25G, colocándola en tarjetas Whatman FTA para su transporte y posterior procesamiento, mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional con la amplificación del gen de citrato-sintasa (gltA) y los cebadores utilizados son Bhcs.781p (GGG GAC CAG CTC ATG GTG G) y Bhcs.1137n (AAT GCA AAA AGA ACA GTA AAC A), los cuales fueron seleccionados de un estudio previo. Se encontró una prevalencia de 9,68% entre un rango de 8,86% y 10,66% (IC 95%) del total de muestras obtenidas. Se identificó Bartonella spp. en Carollia perspicillata, Artibeus lituratus, Phyllostomus elongatus y Platyrrhinus infuscus, en las tres últimas especies no se ha encontrado estudios previos de infección de Bartonella spp. a nivel nacional. Según el grupo de clasificación de acuerdo a la alimentación, las especies frugívoras evidencian el 83,3% (5/6) de resultados positivos. No se encontró asociación entre la presencia de Bartonella spp. y el tipo de alimentación (Prueba exacta de Fisher = 1,0) en este caso frugívoros, omnívoros y otros. Palabras claves: Bartonella spp., murciélagos, bartonelosis, quirópteros. ABSTRACT The aim of the present study was to determine the presence of Bartonella spp. in different groups of non-hematophagous bats in the Taricaya Ecological Reserve in Puerto Maldonado, Madre de Dios. A non-probabilistic sampling was carried out, working with the species of the Chiroptera order, belonging to three classification groups according to relevant ecological diets: frugivores, omnivores and others (including piscivore, carnivores, insectivores and nectarivores). 34 mist nets (6m, 9m and 12m) were used, making a total of 396 meters in 13 non-consecutive nights of effort. Obtaining as a final sample 62 bats, belonging to 16 species. About 30µl of blood were obtained by puncturing the cephalic vein with a sterile 25G needle, placing it on Whatman FTA cards for transport and later processing using the conventional polymerase chain reaction (PCR) technique with gene amplification citrate synthase (gltA) and the primers used are Bhcs.781p (GGG GAC CAG CTC ATG GTG G) and Bhcs.1137n (AAT GCA AAA AGA ACA GTA AAC A), which were selected from a previous study. A prevalence of 9.68% was found between a range of 8.86% and 10.66% (95% CI) of the total samples obtained.We identified Bartonella spp. in species such as Carollia perspicillata, Artibeus lituratus, Phyllostomus elongatus and Platyrrhinus infuscus, species in which we have not found previous studies with Bartonella spp. infection at the national level. By the classification group according to diet, the frugivorous species show 83.3% (5/6) of positive results. No association was found between the presence of Bartonella spp. and the type of feeding (Fisher's exact test = 1.0), in this case frugivores, omnivores and others. Key words: Bartonella spp., bats, bartonellosis, chiroptera INTRODUCCIÓN Los Chirópteros o murciélagos pueden encontrarse alrededor de todo el mundo, ocupando un papel fundamental en nuestro ecosistema debido a su capacidad de polinizar, dispersar semillas y controlar plagas (Fenton y Simmons, 2015). El Perú cuenta con más de 185 especies registradas (Medina et al., 2016; Velazco, 2021), identificándose ocho de las nueve familias registradas en Sudamérica (Quintana y Pacheco, 2007), por lo que estudiar el orden Chiroptera a nivel nacional es de importancia global. Se les considera reservorios ideales de diversos microorganismos patógenos debido a su diversidad de especies, gran distribución geográfica y características únicas dentro de los mamíferos como su capacidad para el vuelo, dispersión rápida, estructura social gregaria, altas tasas de supervivencia, baja fecundidad y gran variedad de hábitos alimenticios (frugívoros, omnívoros, insectívoros, pescadores, carnívoros y nectarívoros) (Cicuttin et al., 2014). El género Bartonella, se caracteriza por ser bacterias gramnegativas con comportamiento intracelular facultativo, parasitando a humanos, animales domésticos, ganado y animales silvestres (Vayssier-Taussat, et al., 2016). Actualmente se han aislado más de 30 especies, de los cuales cerca de 20 producen una amplia variedad de enfermedades infecciosas emergentes y reemergentes, como la enfermedad de Carrión (B. bacilliformis), enfermedad por arañazo de gato o angiomatosis bacilar (B. henselae), fiebre de las trincheras (B. quintana) que son de importancia a nivel nacional. Además, pueden generar endocarditis severas (B. mayotimonensis), presentando una alta mortalidad en países como Estados Unidos (Regier et al., 2016). Su principal fuente de infección es la transmisión por diversos vectores como garrapatas, pulgas, mosquitos, moscas (Blanco y Raoult, 2005); se conoce actualmente que muchos mamíferos como pumas, alces, roedores, marsopas y murciélagos son reservorios, pudiendo transmitir enfermedades a un huésped susceptible (Angelakis y Raoult, 2014; Regier et al., 2016). Desde hace unos años atrás, se viene estudiando a los murciélagos como importantes reservorios de Bartonella spp. a nivel mundial, poniendo especial énfasis en países como Inglaterra (Concannon et al., 2005), Estados Unidos (Hayman et al., 2013), Francia, España (Stuckey et al., 2017b), Belice (Becker et al., 2018a), Guatemala (Bai et al., 2011), China (Han et al., 2017), México (Stuckey et al., 2017a), Argentina y Perú (Bai et al., 2012; Del Valle-Mendoza et al., 2018). Extrapolando está situación a diversos agentes patógenos, resulta importante considerar todos los alcances en salud pública, y así poder comprender detalladamente su comportamiento, características genéticas, funcionales, taxonómicas, entre otras; para poder así enfrentar potenciales emergencias globales como el COVID-19 y posibles reapariciones (Andersen et al., 2020). En el Perú, se conoce muy poco acerca de la ecología de dicha bacteria en murciélagos, así como existe también una mala caracterización de la enfermedad en la clínica diaria de humanos, no pudiendo diagnosticar adecuadamente las presentaciones clínicas por infecciones con Bartonella spp. Por lo que es necesario empezar a considerar que no se trata de brotes esporádicos, sino que se encuentra presente tanto en la población humana como en animal. El departamento de Madre de Dios, es una de las regiones con gran presencia de enfermedades metaxénicas y zoonóticas como Bartonelosis (MINSA, 2019). La población se dedica a la producción agropecuaria, turismo y minería, teniendo contacto indirecto con diversas especies de animales como los murciélagos. Actualmente, debido a la difícil disponibilidad de métodos de diagnóstico específicos no se viene reportando su real prevalencia (Romaní-Romaní, 2008; Diaz y Ricapa, 2018); como de los posibles contagios por contacto con diversas especies de murciélagos (Bai et al., 2018). Por lo que este estudio tuvo como objetivo determinar la presencia de Bartonella spp. en distintos grupos de murciélagos no hematófagos en la Reserva Ecológica Taricaya en Puerto Maldonado, Madre de Dios. MATERIALES Y MÉTODOS Lugar del estudio Estudio descriptivo, transversal y prospectivo realizado en la reserva ecológica Taricaya, ubicada en el sureste de la selva amazónica, provincia de Tambopata, departamento de Madre de Dios, Perú. Reserva eco-turística privada con 476 hectáreas de selva tropical, a 28km de la ciudad, sin acceso por carretera, a una hora río abajo por el río Madre de Dios. Bosque húmedo estacionalmente inundable subtropical con densa vegetación, temperatura entre 14° y 32°C y una alta pluviosidad (Ministerio del Ambiente, 2015b). Coordenadas UTM 19L 50071 – 8615420 y 8615824 (DATUM WGS84). Los análisis de laboratorio se realizaron en el laboratorio de microbiología de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Población y Muestra Se realizó un muestreo no probabilístico, por conveniencia. Trabajando con las especies del Orden Chiroptera, pertenecientes a tres grupos de clasificación de acuerdo a dietas ecológicas relevantes: frugívoros, omnívoros y otros (incluyendo pescadores, carnívoros, insectívoros y nectarívoros). Teniendo como tamaño de muestra 62 individuos. Se capturaron 16 especies de murciélagos no hematófagos, en las cuales, el 51,6% (32/62) de murciélagos capturados fueron hembras y 48,4% (30/62) fueron machos. El 79% de los individuos habían alcanzado la madurez sexual. La especie más abundante fue Carollia perspicillata (21,0%), seguida de Artibeus planirostris (14,5%) y Carollia brevicauda (11,3%), representando en conjunto el 46,8% de individuos muestreados. Se capturaron individuos que se encuentran en alguno de los grupos de clasificación sin buscar tener un igual número en cada grupo. Se excluyeron a hembras preñadas e individuos con un peso menor de 20 gramos. El grupo de clasificación más abundante fue frugívoro (77,4%) (48/62), seguido de omnívoro (12,9%) (8/62); representando el 90,3% del total de animales muestreados Captura y manejo de animales Para la captura de quirópteros se emplearon 34 redes de neblina (6m, 9m y 12m), haciendo un total de 396 metros. Las cuales se instalaron en distintos lugares de posible vuelo o forrajeo. El proceso de muestreo conllevó 13 noches no consecutivas de esfuerzo. La disposición de las redes se determinó siguiendo lo propuesto por Kalko (1998), quien menciona una distribución espacial de los quirópteros en los bosques tropicales asociados a su dieta en este caso frugívoros, omnívoros y otros (incluyendo pescadores, carnívoros, insectívoros y nectarívoros), considerando, además, redes en sotobosque y dosel. Las redes estuvieron activas durante 4 horas (18:00 a 22:00 horas) y fueron revisadas cada 30 minutos. Así mismo, se tuvo en cuenta las noches de luna en fase oscura para tener una mayor probabilidad de captura y evitar el efecto lunar sobre la actividad de los murciélagos (Karlsson et al., 2002; Coria, 2014). Los individuos capturados fueron retirados de las redes con guantes de Nitrilo- Nylon anticorte y posteriormente fueron depositados en bolsas de tela individuales con su codificación determinada para su posterior toma de datos morfométricos (longitud de antebrazo, oreja, pata), como también el registro de peso, edad, sexo y condición reproductiva (Tirira, 1998). La identificación de las especies se realizó en campo siguiendo bibliografía especializada (Gregorin y Taddei, 2007; Diaz et al., 2016), junto con el especialista Blgo. Hugo Zamora. La metodología de campo se realizó tomando en cuenta lo propuesto por el Ministerio del Ambiente (2015a) y modificada para los fines de este estudio. Colecta de muestras Se obtuvieron menos de 30µl de sangre mediante la punción de la vena cefálica con una aguja estéril de calibre 25G (Rizo-Aguilar et al., 2015), inmediatamente se colocó la sangre en tubos capilares y acto seguido a las tarjetas Whatman FTA a temperatura ambiente, las cuales se mantuvieron en bolsas herméticas Zyploc 5x7cm. Después de la recolección de muestras, cada noche todos los murciélagos fueron liberados en su sitio de captura, buscando no afectar el medio ambiente. Extracción de ADN Para la extracción de ADN total de las muestras de sangre de murciélagos untadas en las tarjetas Whatman FTA, se utilizó el kit comercial QIAamp DNA Blood Mini Kit (QIAGEN), siguiendo las instrucciones del fabricante. El ADN extraído se almacenó a - 20oC hasta su procesamiento. Diagnóstico molecular de Bartonella spp. El gen gltA se encarga de codificar el citrato sintasa, una enzima necesaria para completar el ciclo de Krebs, el cual es altamente conservado en el género Bartonella. Un fragmento de aproximadamente 380 pares de bases (pb) del gen citrato sintasa (gltA) fue amplificado utilizando un PCR simple. Habiéndose estandarizado en el laboratorio de diagnóstico, las condiciones del termociclador fueron 95 oC durante 10 minutos y luego 40 ciclos de 94 oC durante 30 segundos, 57 oC durante 1 minuto y 72 oC durante 2 minutos, seguido de un paso final a 72oC durante 5 minutos. El protocolo de PCR y los cebadores utilizados: Bhcs.781p (GGG GAC CAG CTC ATG GTG G) y Bhcs.1137n (AAT GCA AAA AGA ACA GTA AAC A), fueron seleccionados de un estudio previo (Norman et al., 1995). Los productos amplificados fueron revelados en una cámara de electroforesis usando un gel de agarosa al 1.5%. La fotodocumentación se realizó utilizando un transiluminador UV (Cleaver Scientific Ltd Inc.) y una cámara digital (Cleaver Scientific Ltd Inc.). Los tamaños de los productos de PCR fueron analizados mediante comparación con el marcador de peso molecular Tri Dye TM 100pb DNA Ladder (Bio Labs Inc.). Aspectos éticos Este proyecto de investigación fue aprobado por el Comité de Ética de la comisión de Grados y Títulos de la Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Científica del Sur, Lima, Perú con la Resolución Directoral Académica de Carrera N°113- DACMVZ-DAFCVB-U.CIENTÍFICA-2020, así como el Informe Técnico N°D000411- 2020-MINAGRI-SERFOR-DGSPFS y la Resolución de Dirección General N°D000223- 2020-MINAGRI-SERFOR-DGGSPFFS que brinda la Autorización con fines de investigación científica de flora y/o fauna silvestre de parte del Servicio Nacional Forestal y de Fauna Silvestre – SERFOR, miembro del Ministerio de Agricultura y Riego, con el código de Autorización N°AUT-IFS-2020-040. Análisis de Datos Los datos fueron tabulados utilizando el programa Microsoft Excel 2016. Se realizó un análisis descriptivo, univariado y bivariado. Para los análisis descriptivos se reportaron los animales con presencia y ausencia de Bartonella spp., en forma porcentual y se utilizaron distribuciones de frecuencias absolutas y porcentajes de las variables: especies, grupos de clasificación y presencia de Bartonella spp. Se estimaron los intervalos de confianza de una proporción al 95% IC. Los datos estadísticos fueron procesados mediante el programa SPSS versión 25. Se utilizó la prueba exacta de Fisher para poner a prueba la hipótesis nula de no asociación. RESULTADOS De acuerdo a los resultados positivos de PCR a Bartonella spp., se obtuvo un total de 6 muestras positivas, con una prevalencia de 9,68% (6/62) del total de muestras obtenidas, la mayor prevalencia de estos fue en Carollia perspicillata, con 3 muestras de resultado positivo, es decir un 50% del total de muestras con presencia de Bartonella spp., siendo equivalente a la mayor cantidad de muestras procesadas en esta especie (Cuadro 1). Según el grupo de clasificación de acuerdo a la alimentación, las especies frugívoras evidencian el 83,3% (5/6) en relación al total de resultados positivos (Cuadro 2). Se logra identificar que no existe asociación entre la presencia de Bartonella spp. y el tipo de alimentación (Prueba exacta de Fisher = 1,0) que presentan en este caso frugívoros, omnívoros y otros. El 66,7% (4/6) de las muestras positivas fueron hembras. No se detectó Bartonella spp. en murciélagos juveniles. Todas las hembras positivas a Bartonella spp. muestran una condición reproductiva igual siendo esta, vagina cerrada pezón desarrollado no turgente y a su vez los machos con testículo no escrotal (Cuadro 3). La Figura 1 y 2, nos muestra los resultados positivos de PCR de murciélagos no hematófagos a Bartonella spp., revelados en la cámara de electroforesis. Cuadro 1. Frecuencia y porcentaje de las diferentes especies de murciélagos capturados (n=62) y muestras positivas de resultados de PCR a Bartonella spp. en las muestras obtenidas de murciélagos en la Reserva Ecológica Taricaya, Madre de Dios, Perú (Nov- Dic, 2020). Muestras Muestras Obtenidas IC (95%) Positivas Especie Frecuencia Frecuencia % % Mín-Máx (n) (n) Artibeus lituratus 6 9,7 1 16,7 0,02 - 0,64 Artibeus planirostris 9 14,5 0 0,0 - Carollia benkeithi 1 1,6 0 0,0 - Carollia brevicauda 7 11,3 0 0,0 - Carollia perspicillata 13 21,0 3 23,1 0,16 - 0,84 Chiroderma trinitatum 1 1,6 0 0,0 - Platyrrhinus infuscus 4 6,5 1 25,0 0,02 - 0,64 Sturnira Tildae 3 4,8 0 0,0 - Uroderma bilobatum 3 4,8 0 0,0 - Vampyrodes caraccioli 1 1,6 0 0,0 - Phyllostomus elongatus 2 3,2 1 50,0 0,02 - 0,64 Phyllostomus hastatus 6 9,7 0 0,0 - Lophostoma silvicolum 2 3,2 0 0,0 - Noctilio albivatram 2 3,2 0 0,0 - Phyllostomus discolor 1 1,6 0 0,0 - Trachops cirrhosus 1 1,6 0 0,0 - TOTAL 62 100,0 6 9,68 2,16-17,18 Cuadro 2. Resultados de PCR a Bartonella spp. de murciélagos según el grupo de clasificación, muestreados en la reserva ecológica Taricaya, Madre de Dios, Perú (Nov- Dic, 2020). Muestras obtenidas Muestras Positivas Grupo de Clasificación IC (95%) Frecuencia (n) % Frecuencia (n) % Frugívoro 48 77,4 5 10,4 0,36 – 0,98 Omnívoros 8 12,9 1 12,5 0,02 – 0,64 Otros 6 9,7 0 0 - TOTAL 62 100,0 6 9,68 0,82-0,98 Cuadro 3. Características de sexo, edad, peso, largo de antebrazo y condición reproductiva de resultados positivos de PCR a Bartonella spp. en murciélagos muestreados en la reserva ecológica Taricaya, Madre de Dios, Perú (Nov-Dic, 2020). Peso Largo Condición Especie Sexo Edad (g) Antebrazo Reproductiva Platyrrhinus infuscus Macho Adulto 73,0 56,0mm TNE* Carollia perspicillata Hembra Adulto 20 43,4mm VCPDNT** Artibeus lituratus Hembra Adulto 78 61,4mm VCPDNT** Phyllostomus elongatus Hembra Adulto 50 64,3mm VCPDNT** Carollia perspicillata Hembra Adulto 22 43,9mm VCPDNT** Carollia perspicillata Macho Adulto 29 42,1 TNE* *TNE: testículo no escrotal, **VCPDNT: vagina cerrada pezón desarrollado no turgente (Vela y Pérez-Torres, 2013). Figura 1. Aplicación de la prueba de PCR a muestras sanguíneas de murciélagos en Reserva Ecológica Taricaya, Madre de Dios. Carril del 1 al 22, con resultado positivo en carriles 9 y 11. Lad= Ladder; + = resultado positivo; - = resultado negativo. Figura 2. Aplicación de la prueba de PCR a muestras sanguíneas de murciélagos en Reserva Ecológica Taricaya, Madre de Dios. Carriles del 1 al 10, con resultado positivo en carriles 5, 8 y 10. Lad= Ladder; + = resultado positivo; - = resultado negativo. DISCUSIÓN El presente estudio evidencia la presencia de Bartonella spp. en poblaciones de murciélagos en el sureste amazónico del Perú. Los murciélagos vienen siendo un importante reservorio de dicha bacteria en el Perú, aunque la prevalencia general (9,68%) (Cuadro 1) es menor en comparación con reportes anteriores; como en el artículo de Bai et al. (2012) que presenta una prevalencia de 24,1%, esto podría deberse a que en nuestro estudio no consideramos especies hematófagas como el murciélago hematófago común, Desmodus rotundus; que evidencia una alta prevalencia de infección (entre 50%) en estudios previos (Bai et al., 2011, Becker et al., 2018a; André et al., 2019). Podría ser probable una línea de infección de parte de las poblaciones hematófagas a las no hematófagas, a través de la contaminación de la piel con heces de artrópodos infectados, aglutinación u otra ruta desconocida (Ikeda et al., 2020). Aunque existe una contraparte, que considera que la propagación de Bartonella a murciélagos ocurrió por primera vez, a través de un vector hematófago contaminado, infectando indistintamente diferentes especies (Clifton et al., 2020). Por lo que, se requieren estudios futuros de análisis filogenéticos y posibles vías de trasmisión entre murciélagos. Este es el primer reporte de la presencia de Bartonella spp. en murciélagos de las especies: Artibeus lituratus (16,7%), Phyllostomus elongatus (50%) y Platyrrhinus infuscus (25%) en el Perú (Cuadro 1); incrementando el número de especies que cumplen el rol de reservorio de esta bacteria a nivel nacional. La presencia de Bartonella spp. en la especie Carollia perspicilata a nivel nacional ya ha sido anteriormente identificada por Bai et al (2012). A diferencia de Stuckey et al. (2017a) que evidencia una mayor probabilidad de infección por Bartonella spp. en especies hematófagas, seguido de insectívoras y finalmente fitófagas; nuestro estudio no encontró una asociación entre la presencia de Bartonella spp, y el tipo de hábito alimenticio. Stuckey et al. considera la hipótesis de Schneeberger et al. (2013) indicando que existe una correlación entre el hábito alimenticio y el sistema inmunológico en murciélagos; el recuento total de glóbulos blancos varía entre las especies según el tipo de alimentación, siendo mayor en hematófagos debido a un mayor riesgo de contraer enfermedades infecciosas. En contraparte, nuestro estudio considera la falta de asociación debido a la organización social que presentan estos animales, su amplia distribución de especies de murciélagos en un mismo dormidero (Kunz y Femton, 2006; Mering y Chambers, 2014), así como la alta presencia de Bartonella spp. en sus ectoparásitos como pulgas, moscas, garrapatas, y/o ácaros (Billeter et al., 2012; Morse et al., 2012), pudiendo generar una eficiente trasmisión entre especies, como se da con la transmisión del virus de la rabia entre murciélagos hematófagos o no hematófagos, que habitan en cuevas de millones de individuos y se transmite por mordedura entre ellos o por vía aérea, a través de la mucosa nasal (Streicker et al., 2010; Allendorf et al., 2012, Becker et al., 2018b). Los murciélagos ofrecen diversos beneficios como dispersadores de semillas, controladores de plagas y polinizadores; una pérdida abrupta de ellos conduciría a altas pérdidas económicas en la agricultura a nivel nacional (Boyles et al., 2011). En contra parte, Hamilton et al (2012), plantea una hipótesis, conocida como “bat seeding”, en la que considera a los murciélagos como la especie primaria y clave para la propagación de Trypanosoma cruzi al ser humano. Actualmente, se considera que esta hipótesis puede aplicarse a diversas rutas de infección de parásitos en mamíferos hasta llegar al ser humano, como en el caso de Bartonella spp., pudiendo llegar a generar desde enfermedades benignas y autolimitadas como linforreticulosis benigna hasta altamente graves como endocarditis infecciosas mortales. (Clifton et al, 2020; Ikeda et al., 2020). Por lo que es importante, realizar más estudios considerando una mayor inclusión de individuos a la captura, la vulnerabilidad de la muestra al transporte y más noches de trabajo por muestra conseguida para poder controlar posibles zoonosis (Liang et al., 2015; Becker et al., 2018a). A pesar de las limitaciones del estudio, los resultados nos ofrecen un avance en la comprensión de Bartonella spp. y una potencial aproximación a la problemática de enfermedades metaxénicas altamente presentes en el departamento de Madre de Dios. Se considera que existe una subestimación de la prevalencia de Bartonelosis en la clínica diaria de Madre de Dios, debido a la falta de sensibilidad y especificidad en los métodos de diagnóstico de los programas nacionales de vigilancia (Pachas, 2001; Diaz y Ricapa, 2018). Estos son frotis sanguíneo, cultivo en diversos agares como el agar Columbus con sangre de cordero o en medio bifásico (Ventura y Padilla, 2006), pruebas serológicas (anticuerpos) (Sander et al., 2001) u otros, estos métodos son inespecíficos para todo el grupo de Bartonella y presentan un crecimiento lento en cultivo, entre 4 hasta 6 semanas de incubación. Por lo que, resulta poco útil para una rápida identificación. Mientras que el análisis por PCR, como lo usado en el presente estudio, es útil para la detección e identificación general o específica del género Bartonella spp y presenta una alta especificidad y sensibilidad (100% en ambas). (Norman et al, 1995; La Scola et al, 2003; Kosoy et al, 2018). Debido a lo mencionado en el párrafo anterior, sería importante considerar que tanto afecta realmente a la población del sureste amazónico, no solo considerando como vía de transmisión a ectoparásitos como mosquitos, garrapatas o pulgas (Del Valle- Mendoza et al., 2018), sino también el contacto indirecto (mordedura u otros) con murciélagos hematófagos como no hematófagos, debido a que se han encontrado estudios donde diversas cepas de Bartonella spp. que afectan a los murciélagos pueden afectar a los humanos, aunque no se sabe a totalidad el mecanismo de transmisión (Mannerings et al., 2016; Bai et al., 2018). En la actualidad, en medio de una emergencia sanitaria mundial debido al COVID-19, es importante considerar todos los alcances en salud pública y comprender detalladamente el comportamiento de los agentes patógenos como el estudiado en el presente trabajo, para enfrentar de mejor forma nuevas cepas emergentes o posibles re- emergencias (Andersen et al, 2020). Pues no solo se trataría de cepas anteriormente conocidas (B. bacilliformis, B. henselae, B. quintana), sino de nuevas cepas que pueden ser altamente mortales tanto para el ser humano, como la reciente cepa B. mayotimonensis identificada en Estados Unidos (Veikkolainen et al., 2014; Han et al, 2017; Lilley et al., 2017; Stuckey et al, 2017b). Por lo que es necesario incrementar el número y alcance de los futuros estudios sobre patógenos en murciélagos a nivel nacional. CONCLUSIONES • Se identificó la presencia de Bartonella spp. con una prevalencia de 9,68% en 4 especies de murciélagos no hematófagos (Artibeus lituratus, Carollia perspicillata, Phyllostomus elongatus, Platyrrhinus infuscus) en la provincia de Madre de Dios, Perú. • Se identificó Bartonella spp. en especies como Artibeus lituratus, Phyllostomus elongatus y Platyrrhinus infuscus anteriormente no registradas a nivel nacional. BIBLIOGRAFÍA 1. 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