FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y BIOLÓGICAS CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA “DISEÑO Y VALIDACIÓN DE PRIMERS PARA EL GEN PRM3 EN ALPACAS” Tesis para optar el título profesional de: MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA Presentado por: BRUNA MEDRANDA ROCHA (0000-0002-5712-3736) Asesor: SHIRLEY SUJEY EVANGELISTA VARGAS: (0000-0001-6105- 1889) Lima – Perú 2021 AGRADECIMIENTOS Esta investigación se realizó gracias al proyecto “Caracterización de marcadores moleculares en genes relacionados a espermatogénesis y fertilidad espermática a partir de transcriptomas de testículo y epidídimo de alpaca” (código: E041-2016-01), contrato 118-2016 financiado por el Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de Innovación Tecnológica (FONDECYT). Agradezco también a mi familia, por todo el apoyo a lo largo de mi carrera. A Shirley y Alejandra, por toda la ayuda y orientación para el desarrollo de este trabajo y a todos los tesistas del proyecto, con quienes trabajamos en conjunto. A todos los técnicos de laboratorio y personas que de alguna manera contribuyeron a la realización de esta tesis. RESUMEN Hasta la fecha no se ha anotado al gen PRM3 en el genoma de la alpaca, a pesar de su potencial relación con la motilidad espermática y su potencial utilidad para la selección y reproducción. El objetivo del presente estudio fue diseñar primers para amplificar por PCR convencional el gen PRM3 en alpacas. Los primers fueron diseñados empleando el programa Primer-BLAST y seleccionados con el programa OligoAnalyzer. De los 10 pares de primers diseñados, seleccionamos a los dos mejores de acuerdo al tamaño del amplicón (240 y 328pb) y sus propiedades termodinámicas (espontaneidad de hairpin y dímeros). Con el fin de validar los primers diseñados se realizaron pruebas de PCR convencional usando ADN genómico extraído a partir de tejido testicular. Los productos de PCR fueron corridos mediante electroforesis horizontal en gel agarosa al 2% y visualizados con SafeView Classic (abm®). Las bandas a tamaño esperado permitieron comprobar que el diseño de primers fue exitoso. Se concluyó que fue posible diseñar primers in silico para el gen PRM3 en alpaca y validarlos experimentalmente mediante PCR convencional. Palabras clave: Diseño de primers, ADN, PRM3, alpacas, PCR ABSTRACT To date, the PRM3 gene has not been annotated in the alpaca genome, despite its potential relationship with sperm motility and its potential utility for selection and reproduction. The objective of the present study was to design primers to amplify the PRM3 gene in alpacas by conventional PCR. Primers were designed using the Primer- BLAST program and selected with the OligoAnalyzer program. From the 10 pairs of primers designed, we selected the best two according to the size of the amplicon (240 and 328bp) and their thermodynamic properties (spontaneity of hairpin and dimers). In order to validate the designed primers, conventional PCR tests were performed using genomic DNA extracted from testicular tissue. The PCR products were run by horizontal 2% agarose gel electrophoresis and visualized with SafeView Classic (abm®). The bands at the expected size allowed us to verify that the primer design was successful. It was concluded that it was possible to design in silico primers for the PRM3 gene in alpaca and to validate them experimentally using conventional PCR. Key words: Primer design, DNA, PRM3, alpacas, PCR